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Stocks |
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Soluzione Stock Fosfato: |
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| NaH2PO4 H2O |
1 g |
| Per 200 mL H20 distiallata |
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Soluzione Stock Tracce Metalli: |
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| FeCl3 |
0.13 g |
| EDTA |
0.87 g |
| CuSO4 5H2O 0.98 g/100 mL |
100 microL |
| ZnSO4 7H2O 2,2 g /100 mL |
100 microL |
| CoCl2 6H2O 1 g/100 mL |
100 microL |
| MnCl2 4H2 18 g/100 mL |
100 microL |
| Na2MoO4 2H2O 0.63 g/100 mL |
100 microL |
| Per 200 mL H20 distillata |
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Stock Vitamine: |
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| Biotina |
250 microL |
| Vitamina B12 |
250 microL |
| Thiamina HCl |
50.0 mg |
| Portare a 250 mL in H20 bi-distillata |
Suddividre in aliquote da 200 (o 400) microL in tubi da 1.5 mL; Congelare e mantenere a -20 C
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Soluzione NaHCO3 (preparare fresca): |
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| NaHCO3 |
0.42 g |
| In 10 mL di H20 distillata |
| - poi sterilizzare per filatrazione prima di aggiungere alle soluzione di F/2
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Piastre Agar: |
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- Preparare un soluzione con 2X di tutti gli stock F/2 per stessa quantita di Acqua marina artificiale, ma senza vitamin (tipicamente 200 mL) + (opzionale, aggiungere 20 mM HEPES finale (da una soluzione sterilizzara per filtrazione))
- Preparare una soluzione 3% w/v di Agar Nobile in acqua bidistillata e autoclavarla (typicamente 200 mL in una bottoglia da 500 mL)
- Lasciar raffreddare la soluzuione di agar autoclavato fino a circa 40 C (in un bagno a immersione),
- Miscriare quindi la soluzione di agar alla soluzione 2X di F/2 solution, mischiare, aggiungere le vitamine e colare le piastre
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Scarica la ricetta del mezzo F/2 + Acqua marina artificiale in formato PDF: F2.pdf |
